Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Стандартный образец и единица действия инсулина.
Стандартный образец инсулина представляет собой препарат высокоочищенного инсулина, активность которого определена путем многократного сопоставления с активностью Международного Стандарта и составляет не менее 25 ЕД в 1 мг. За единицу действия (ЕД) принимают специфическую активность количества массы стандартного образца, эквивалентного по биологическому действию 1 Международной Единице инсулина.
Примечание. Приготовление растворов стандартного образца и испытуемого препарата инсулина. Точную навеску стандартного образца инсулина растворяют в растворе хлористоводородной кислоты (0,003 моль/л) с рН 2,7 - 3,0, содержащем консервант в такой же концентрации, как испытуемый препарат.
Срок годности основного раствора стандартного образца инсулина 4 месяца при температуре 4 0С.
Перед опытом основной раствор стандартного образца инсулина разводят раствором хлористоводородной кислоты (0,003 моль/л) до концентрации 1 ЕД в 1 мл. Испытуемый препарат инсулина разводят этим же раствором хлористоводородной кислоты до концентрации 1 ЕД в 1 мл, исходя из его предполагаемой активности.
Метод определения биологической активности.
Определение биологической активности инсулина проводят на здоровых кроликах массой 2,5 - 3,5 кг. Животных массой 1,8 - 2,3 кг предварительно не менее
14 суток содержат в условиях вивария, где они получают овес, сено или свежую траву, корнеплоды, комбинированный корм и воду. По истечении этого срока определяют чувствительность кроликов к инсулину. Для этого кроликам дважды с интервалом 7 - 8 суток после 18 часов голодания вводят подкожно раствор стандартного образца инсулина из расчета 0,5 ЕД на 1 кг массы тела животного и определяют величину снижения концентрации сахара в крови в процентах. Кровь для исследования берут из краевой вены уха животных до введения инсулина и через 1,5 и 2,5 часа после его введения (для расчета берут среднюю концентрацию сахара в крови из двух определений после введения инсулина). Кровь берут в условиях, не допускающих чрезмерного волнения кроликов. Из опытов исключают животных с исходной концентрацией сахара в крови ниже и выше пределов, установленных для используемого метода определения содержания сахара в крови (ниже 75 мг % и выше 120 мг % для феррицианидного метода, ниже 52 мг % и выше 94 мг % для глюкозооксидазного метода), а также тех животных, которые реагируют на введение инсулина судорогами или у которых снижение концентрации сахара в крови составляет менее 15 % по отношению к исходной концентрации. Определение биологической активности инсулина проводят не ранее чем через 7 - 8 суток после испытания на чувствительность.
Отобранных для опытов кроликов лишают корма (но не воды) на 18 часов, предшествующих введению инсулина. Животных распределяют на две группы способом случайного выбора (в каждой группе должно быть не менее 9 кроликов). Непосредственно перед введением инсулина кроликов взвешивают и определяют исходную концентрацию сахара в крови. Кроликам одной группы вводят подкожно по
0,5 ЕД стандартного образца инсулина (S) на 1 кг массы тела, кроликам другой группы - такую же дозу испытуемого препарата инсулина (Т). Через 1,5 и 2,5 часа после введения инсулина у животных снова определяют концентрацию сахара в крови.
Для каждого кролика рассчитывают снижение концентрации сахара (X) в крови в процентах по формуле:
X = azl х 100,
a
где
а - исходная концентрация сахара в крови в миллиграмм-процентах;
b - средняя концентрация сахара в крови в миллиграмм-процентах из двух определений, проведенных через 1,5 и 2,5 часа после введения инсулина.
Как и при испытании кроликов на чувствительность к инсулину, при расчетах не учитывают животных с исходной концентрацией сахара в крови ниже и выше пределов, установленных для используемого метода, а также реагирующих на указанную дозу инсулина судорогами или дающих снижение концентрации сахара в крови менее 15% по отношению к исходной концентрации.
Через 3 - 5 суток на этих же кроликах проводят повторное испытание с той разницей, что животным из группы, получавшей стандартный образец инсулина (S), вводят испытуемый препарат инсулина (Т), а животным группы, получавшей (Т), вводят (S).
Рассчитывают среднюю величину снижения концентрации сахара в крови на стандартный образец (% S) и на испытуемый препарат (% Т) по данным всего опыта.
Отношение % Т / %S выражает относительную активность (R) испытуемого препарата (Т). Для выражения активности испытуемого препарата (Т) в ЕД его предполагаемую активность (А) умножают на R: Т = R • А.
Пример: при определении биологической активности инсулина для инъекций с предполагаемой активностью 40 ЕД в 1 мл получили следующие величины снижения концентрации сахара в крови в процентах (Y).
Первая часть испытания Вторая часть испытания
Ys Yt Yt Ys
49 48 50 50
61 50 58 51
